PCR實(shí)驗(yàn)室風(fēng)淋室與凈化設(shè)備要求
當(dāng)前位置:首頁 >> 風(fēng)淋室技術(shù)文章 >> 正文PCR實(shí)驗(yàn)室風(fēng)淋室與凈化設(shè)備要求:
實(shí)驗(yàn)室凈化設(shè)備,比如臭氧、紫外線燈、風(fēng)淋室(包括貨淋室)、傳遞窗、超凈工作臺(tái)、FFU、高效送風(fēng)口、互聯(lián)鎖等凈化輔助設(shè)備??諝膺^濾系統(tǒng),有初效過濾器、中效過濾器、高效過濾器等。
PCR實(shí)驗(yàn)室有哪些凈化要求?
分類:實(shí)驗(yàn)室家具
一、PCR實(shí)驗(yàn)(experiment)室并沒有嚴(yán)格的凈化要求,但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能(maybe)性,宜采用全送全排的氣流組織形式。實(shí)驗(yàn)室凈化由于潔凈實(shí)驗(yàn)室-生物安全實(shí)驗(yàn)室內(nèi)操作對(duì)象是危險(xiǎn)性的微生物,對(duì)人體、動(dòng)植物或環(huán)境具有危害,必須通過采用合理的空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng),保持潔凈實(shí)驗(yàn)室-生物安全實(shí)驗(yàn)室的相對(duì)負(fù)壓環(huán)境無論何時(shí)都不被破壞,以保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)危險(xiǎn)性微生物不能向外部環(huán)境中擴(kuò)散。同時(shí),要嚴(yán)格控制(control)送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。
2.1試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)
二、實(shí)驗(yàn)(experiment)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原料(raw material)必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。 對(duì)與氣流壓力的控制(control),本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求。
標(biāo)本制備區(qū)
試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)
標(biāo)本制備區(qū)
擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)
緩沖區(qū)
傳遞窗
擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)
三、本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。
四、該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測(cè)定。凈化實(shí)驗(yàn)室必須控制實(shí)驗(yàn)室的潔凈度,對(duì)新風(fēng)進(jìn)行過濾,使實(shí)驗(yàn)室達(dá)到一定的凈化要求。其中排風(fēng)系統(tǒng)是重點(diǎn),對(duì)于保證實(shí)驗(yàn)室相對(duì)負(fù)壓環(huán)境和有效過濾室內(nèi)污染排風(fēng)起著重要的作用。
PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建設(shè)中容易出現(xiàn)的問題(實(shí)驗(yàn)室家具):
1、PCR實(shí)驗(yàn)室的空氣流向必須嚴(yán)格按照試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進(jìn)行,防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。需要嚴(yán)格的通風(fēng)設(shè)計(jì),若通風(fēng)設(shè)計(jì)不合理,會(huì)使風(fēng)速流向混亂,甚至危害人們健康。
2、人流路徑與物流路徑設(shè)計(jì)不合理:
進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室區(qū)域工作人員應(yīng)該按照以下路徑:公共清潔區(qū)——更衣間(更換潔凈服)——緩沖間——風(fēng)淋室——污染實(shí)驗(yàn)區(qū)。
工作人員退出實(shí)驗(yàn)室的路徑為:污染試驗(yàn)區(qū)——緩沖間——風(fēng)淋室(有條件的可設(shè)置)——更衣間——公共清潔區(qū)
PCR實(shí)驗(yàn)室污染方式及處理(實(shí)驗(yàn)室家具)
分類: 實(shí)驗(yàn)室家具
有實(shí)驗(yàn)室的地方,就不可避免的會(huì)出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室污染。實(shí)驗(yàn)室的污染,不僅會(huì)影響實(shí)驗(yàn)與科研的質(zhì)量和效果,還對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員的身體健康有損害,PCR實(shí)驗(yàn)室的污染原因及解決方法。
PCR實(shí)驗(yàn)室污染
標(biāo)本間交叉污染:標(biāo)本污染主要有收集標(biāo)本的容器被污染,或標(biāo)本放置時(shí),由于密封不嚴(yán)溢于容器外,或容器外粘有標(biāo)本而造成相互間交叉污染;標(biāo)本核酸模板在提取過程中,由于吸樣槍污染導(dǎo)致標(biāo)本間污染;有些微生物標(biāo)本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴(kuò)散,導(dǎo)致彼此間的污染。
PCR試劑的污染:主要是由于在PCR試劑配制過程中,由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染:這是PCR反應(yīng)中最主要最常見的污染問題。因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量大,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限,所以極微量的PCR產(chǎn)物污染,就可造成假陽就可形成假陽性。
還有一種容易忽視,最可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式是氣溶膠污染;在空氣與液體面摩擦?xí)r就可形成氣溶膠,在操作時(shí)比較劇烈地?fù)u動(dòng)反應(yīng)管,開蓋時(shí)、吸樣時(shí)及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染。
實(shí)驗(yàn)室中克隆質(zhì)粒的污染:在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室及某些用克隆質(zhì)粒做陽性對(duì)照的檢驗(yàn)室,這個(gè)問題也比較常見,因?yàn)榭寺≠|(zhì)粒在單位容積內(nèi)含量相當(dāng)高,另外在純化過程中需用較多的用具及試劑,而且在活細(xì)胞內(nèi)的質(zhì)粒,由于活細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖的簡(jiǎn)便性及具有很強(qiáng)的生命力,其污染可能性也很大。
PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)方案
分類: 實(shí)驗(yàn)室裝修
1、主體結(jié)構(gòu):
主體為彩鋼板、鋁(Al)合金(熔點(diǎn)660)型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合金
50內(nèi)圓角鋁(Al),從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結(jié)構(gòu)牢固,線條簡(jiǎn)明,美觀大方,密封性好。
2、標(biāo)準(zhǔn)的四區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié):
將PCR過程分成試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備和PCR擴(kuò)增,產(chǎn)物分析(Analyse)四個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)(experiment)區(qū)。凈化實(shí)驗(yàn)室控制系統(tǒng)是整個(gè)潔凈實(shí)驗(yàn)室安全運(yùn)行的神經(jīng)中樞,由于潔凈實(shí)驗(yàn)室-生物安全實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)對(duì)象是危險(xiǎn)性的微生物,出于嚴(yán)格控制污染的原則,它要求以最少的維護(hù)人員,運(yùn)用最優(yōu)化的管理維護(hù)手段,來實(shí)時(shí)監(jiān)控每一個(gè)實(shí)驗(yàn)室中設(shè)備所處的物理環(huán)境,保證實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行過程中始終處于相對(duì)負(fù)壓環(huán)境,防止危險(xiǎn)性微生物外泄。整個(gè)區(qū)域有一個(gè)整體緩沖走廊。每個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū),同時(shí)各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié),使整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)過程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染并降低(reduce)擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)人員和環(huán)境的污染。
可打開緩沖區(qū),緩沖區(qū)和 PCR 擴(kuò)增區(qū)的排風(fēng)扇往外排氣,在實(shí)驗(yàn)(experiment)區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風(fēng)量(定義:單位時(shí)間內(nèi)空氣的流通量)可調(diào)的回風(fēng)口,空氣通過回風(fēng)口向室內(nèi)換氣。
3、消毒:
在三個(gè)實(shí)驗(yàn)(experiment)區(qū)和三個(gè)緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈,供消毒用。潔凈實(shí)驗(yàn)室無菌試驗(yàn)室、生物安全實(shí)驗(yàn)室必須保證人身安全、環(huán)境安全、廢棄物安全和樣本安全,能長(zhǎng)期而安全地運(yùn)行,同時(shí)還為需要實(shí)驗(yàn)室工作人員提供一個(gè)舒適、而良好的工作環(huán)境。
在試劑準(zhǔn)備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū)還設(shè)置移動(dòng)紫外線(Ultraviolet rays)燈,對(duì)實(shí)驗(yàn)(experiment)桌進(jìn)行局部(part)消毒。
4、不銹鋼(不銹耐酸鋼)傳遞(transmission)窗:
試劑和標(biāo)本通過機(jī)械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和標(biāo)本在傳遞過程中不受污染(人物分流)。
5、地面
地面建議使用聚氯乙烯(Polyvinyl chloride)卷材地面或自流坪地面,整體性好。便于進(jìn)行清掃,耐腐蝕(釋義:指腐爛、消失、侵蝕等)。